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蛭弧菌特點及使用方法

   日期:2018-11-27     來源:聚農網    作者:jn720    瀏覽:479    評論:0    

  蛭弧菌是一種具有類似噬菌性質的細菌,但它不是噬菌體,更不是細菌。它對弧菌有較強的裂解作用,是水產養殖中主要病菌“弧菌”的天敵。

  近兩年,蛭弧菌產品的使用突然火了起來,市面上也出現了各式各樣的蛭弧菌產品,有液體蛭弧菌,有粉劑蛭弧菌,還有蛭弧菌凍干粉,尤其是蛭弧菌凍干粉成了推廣的新潮流,同樣都是蛭弧菌凍干粉,有的產品用的很好,有的產品用了卻見不到效果,很多養殖戶甚至廠家都對蛭弧菌相關產品抱有疑問,本文通過對蛭弧菌知識的初步梳理,為養殖戶、經銷商、公司更好地理解、使用蛭弧菌產品提供一些思路。

  蛭弧菌也叫噬菌蛭弧菌,屬于細菌界變形細菌門蛭弧菌科蛭弧菌屬,具有細菌的一切形態特征:

  單細胞,弧形或逗點狀,有時呈螺旋狀。0.3-0.6×0.8-1.2微米,或僅為桿菌長度的1/3-1/4,端生鞭毛,比其他細菌的鞭毛粗3倍~4倍,與鞭毛相對的一端有釘狀纖毛,被稱為“感染錐子”,與菌體的識別和吸附宿主有關。其運動活躍,革蘭氏染色陰性。

  蛭弧菌比通常的細菌要小,能通過細菌濾器,所以普通的顯微鏡是看不到它的,至少要用到油鏡,甚至需要染色才行。在相差顯微鏡下,可見蛭弧菌呈跳躍式的運動;電鏡觀察,蛭弧菌以弧、桿狀為主。因為小,低于2萬轉的離心機對蛭弧菌的濃縮是沒有意義的,而2萬轉的離心機一般是實驗室才會配備。

  蛭弧菌有寄生型,也有兼性寄生,極少數營腐生。非寄生型營腐生生活,可在蛋白胨和酵母提取物培養基上生長繁殖。從自然界分離得到的蛭弧菌都是依賴寄生型,迄今為止,還沒有直接從自然界分離得到非寄生型。

  寄生型蛭弧菌生長,一般要求pH6.0-8.5;溫度23℃~37℃,低于12℃,高于42℃時均不生長;能穩定分解蛋白質,一般不利用碳水化合物,而以肽、氨基酸作碳源和能源;能液化明膠;嚴格好氧。

  溫度不在適宜范圍的時候,蛭弧菌是不生長的,所以使用時要充分考慮這一點。比如3月、4月份用它泡苗,效果肯定不好,如果改成拌料投喂,會對腸道控菌產生積極影響。

  蛭弧菌的繁殖需要氧氣,使用的時候也建議在早上8點~10點使用,這樣可以獲得較為充足的溶氧。另外,其耗氧不會達到非常劇烈的程度,因為其繁殖代時一般要4小時~6小時。

  蛭弧菌與宿主細胞之間,常表現出一定的特異性。不過,有的特異性較差,能侵入多種細菌。例如不同的蛭弧菌菌株,能侵入各類不同的植物病原菌。

  從這一點上看,其比噬菌體(病毒)、細菌素(蛋白質)的廣譜性要好。實際上蛭弧菌可感染許多不同科屬的菌,但其總體上有一定偏向性,比如其可感染大多數革蘭氏陰性細菌(如志賀氏菌屬、沙門氏菌屬、埃希氏菌屬、歐文氏菌屬、變形桿菌屬、弧菌屬、假單胞菌屬、鉤端螺旋體等微生物),但只對少數的革蘭氏陽性(如糞鏈球菌、乳酸菌等)細菌感興趣,比如其不裂解枯草桿菌,同時也有報道指出其對某些真菌和腸道病毒也有一定的裂解活性。

  寄生的特異性也對實際使用方法有很大的影響,即蛭弧菌是不是不管好菌壞菌都會攻擊?如果是這樣的話,那么很難被我們所用了,實際上,其有一定傾向性,這就給實際的應用提供了更多的可能性。

  華南理工大學郭衍彪郭衍彪(2016年)的研究指出,蛭弧菌BDW03對試驗組大菱鲆腸道沒有控制作用的菌屬為8個(占53.3%),這8個菌屬中多為革蘭氏陽性菌屬(6/8)。另外,其通過乳酸菌拌食餌料和潑灑BALOs喂食大菱鲆60小時后,乳酸菌和BALOs對大菱鲆腸道菌群中革蘭氏陰性菌的控制作用(分別占總菌屬的33.3%和26.7%)優于對革蘭氏陽性菌的控制作用(分別占總菌屬的26.7%和20.0%)。這也間接指出了蛭弧菌對細菌的裂解可能有一定的偏向性。

  上海水產大學生命科學與技術學院徐琴等人(2009)的研究指出,加噬菌蛭弧菌和黏紅酵母組的試驗效果不理想,表明這兩株菌體之間有一定的拮抗作用。而聯合使用噬菌蛭弧菌和球形紅假單胞菌(是紫色非硫光合細菌紅假單胞菌屬的一個種)組展示了凈化水質,預防病害的優良前景,此組能有效地吸收氨氮、硫化物等有害物質。這也指出了蛭弧菌是直接可以和某些光合細菌直接混合使用的,這一點大大提高了使用的方便性。

  再加上其他專家的一些總結,基本上蛭弧菌更偏向于革蘭氏陰性桿菌,同時從即有的論文得知,其最好不要用酵母混用,但蛭弧菌可以和光合細菌混用,建議最好分開使用。同時還有一個關鍵點,即在一個20天的周期內,蛭弧菌對水體的調控作用能達到近2周時間。

  蛭弧菌要用雙層平板而不用單層平板法檢測,主要原因在于培養皿底部并不是十分平整,因此注入少量培養基鋪平底部作為下層,會獲得幾近水平的底部,然后在上面將噬菌體和細菌混合物的培養基(比較薄)注入作為上層,這樣使得觀察物在同一平面,更利于噬菌斑的觀察及分離純化。

  揚州大學王亞麗(2007年)的研究指出,將蛭弧菌分離株BD5W以107pfu/mL濃度給小鼠灌胃,試驗組和對照組均健康,證明噬菌蛭弧菌對小鼠沒有毒性作用。

  江蘇省泰州市海陵區畜牧獸醫站徐懿(2011年)在噬菌蛭弧菌BD57的急性毒性試驗研究指出,根據《獸藥試驗技術規范匯編》的要求選用小白鼠進行了急性毒性試驗。分別采用灌胃和腹腔注射法進行了急性毒性試驗,試驗結果表明,噬菌蛭弧菌BD57對小鼠沒有毒性作用。

  華南理工大學陳麗蕓(2012年)的研究也指出,至今沒有發現蛭弧菌對真核細胞有毒的報道,對小白鼠、豚鼠、家兔等動物無毒性作用,對猴腎、Hela細胞組織培養也未引起細胞病變。迄今為止,相關報道表明蛭弧菌對人和某些動物無毒害作用。

  蛭弧菌對于宿主菌的裂解過程一般分為五個步驟:識別、吸附與侵入、定位與合成、復制、裂解。

  識別:在這個過程中,有趣的是蛭弧菌可以通過鞭毛實現跳躍式的運動,而向宿主菌快速移動,其是通過無鞭毛一端粘附于宿主菌表面的。鞭毛在這里起到了非常重要的作用,實際上,在一些發酵的試驗研究過程中也發現,如果發酵罐內的漿葉轉速過快,對鞭毛有損傷的話,蛭弧菌就無法再攻擊宿主。

  吸附與侵入:為了實現吸附與侵入這個目的,蛭弧菌菌體會以100轉/秒以上的速度產生一種機械“鉆孔”效應,加上蛭弧菌入侵時的收縮從而進入宿主菌的周質空間。

  定位與合成:一是蛭弧菌會脫掉鞭毛,二是宿主菌會變成蛭質體。

  復制:蛭弧菌在這個階段實現了復制繁殖。裂解:在最后一個過程中,蛭弧菌會合成鞭毛,裂解宿主的細胞膜,釋放出所有蛭弧菌。

  蛭弧菌有五種保存方法,其中以冷凍干燥法保藏效果最好,1個月的復活率為100%,其次為4℃營養肉湯液保藏法和-20℃甘油保藏法,17個月復活率均為67%。有一點要明確,其冷凍干燥完成之后,是在4℃環境中進行保存的。

  蛭弧菌的使用方法,特別推薦在所有甲殼類養殖動物(小龍蝦、螃蟹、白蝦等)脫殼期之前使用,達到無刺激生物消毒這個效果。

  脫殼期是這些養殖動物特別脆弱的時期,容易感染相關疾病,尤其是溫度升高的時候更是如此;另外,在脫殼期,甲殼類動物特別敏感,很多消毒劑是不能使用的,而蛭弧菌則可以做到安全無刺激;使用上,建議提前2天左右使用,如果能先使用一些補鈣產品之后再使用蛭弧菌那就更好了,因為一定量的鈣離子可以促進蛭弧菌的繁殖。

  推廣“配合化學消毒劑治療疑難雜癥”。到了養殖中后期,在溫度高的時候,有些疾病非常難以治療,主要的特點是止不住、易反復,這個原因主要在于化學消毒劑雖然具備了快速殺菌的效果,但其反彈也非常迅速,一般普通的化學消毒劑或者國標抗生素,使用后24小時~48小時,水體的總菌數甚至弧菌數可能比用前還要高,這可能是難以治療的主要原因。

  為了讓殺菌即迅速又持久,必需結合使用化學消毒劑和蛭弧菌。首先使用化學消毒劑對水底、水面進行綜合消毒,同時內服國標抗生素進行體內消毒,在見到效果之后,再連續使用1次~2次蛭弧菌,就可以看到明顯不同的治療效果。因為化學消毒劑起到了快速壓制的效果,而蛭弧菌則起到了長期壓制有害菌的效果,強強聯合,能有效抑制有害菌的繁殖。

  在使用過硫酸氫鉀底改片后,第二天可以大劑量使用有益菌,此時建議使用蛭弧菌和光合細菌一起混合使用,這一點已通過試驗證明是可行的。也可以按20天一個周期,先行使用光合細菌,一周后再使用蛭弧菌原裝凍干粉,也能達到比較好的使用效果。

  蛭弧菌主要針對大腸桿菌引起的相關腸炎疾病,因為在發酵蛭弧菌之前,必需先行生產大腸桿菌,再將蛭弧菌接種進去,大腸桿菌是蛭弧菌最為喜愛的細菌之一,因此其治療此類腸炎效果會更好一些。另外,蛭弧菌本身就是一個寶庫,其蛋白質含量豐富,可達細胞干重的60%~65%,DNA的含量為5%。

 
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