1 主題內(nèi)容與適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定種子真實(shí)性和品種純度的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)作物種子質(zhì)量的檢測(cè)。
2 引用標(biāo)準(zhǔn)
GB／T 3543. 2 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 扦樣
GB／T 3543．4 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 發(fā)芽試驗(yàn)
3 術(shù)語(yǔ)
3. 1 種子真實(shí)性 genuineness of seed
供檢品種與文件記錄(如標(biāo)簽等)是否相符。
3．2 品種純度 varietal purity
品種在特征特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數(shù)占供檢本作物樣品種子數(shù)的百分率表示。
3．3 變異株 off-type
—個(gè)或多個(gè)性狀(特征特性)與原品種育成者所描述的性狀明顯不同的植株。
3．4 育種家種子 breeder seed
育種家育成的遺傳性狀穩(wěn)定的品種或親本種子的最初一批種子，用于進(jìn)一步繁殖原種種子。
3．5 原種 basic seed
用育種家種子繁殖的第一代至第三代，或按原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程生產(chǎn)的達(dá)到原種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的種子，用于進(jìn)—步繁殖良種種子。
3．6 良種 certified seed
用常規(guī)種原種繁殖的第—代至第三代和雜交種達(dá)到良種質(zhì)景標(biāo)準(zhǔn)的種子，用于大田生產(chǎn)。
4 試劑
苯酚，愈創(chuàng)木酚、過(guò)氧化氫、氫氧化鉀、氫氧化鈉，氯化氫。
5 儀器和設(shè)備
其儀器設(shè)備也隨方法的差異而不同。
a.在實(shí)驗(yàn)室中測(cè)定
配備適宜的儀器(如體視顯微鏡、擴(kuò)大鏡、解剖鏡)與試劑，以供種子形態(tài)、生理及細(xì)胞學(xué)的檢查、化學(xué)測(cè)定及種子發(fā)芽之用。
b. 在溫室和培養(yǎng)室中測(cè)定
配備能調(diào)節(jié)環(huán)境條件的設(shè)備(如生長(zhǎng)箱)，以利誘導(dǎo)鑒別性狀的發(fā)育。
c. 在田間小區(qū)里鑒定
需具有能使鑒定性狀正常發(fā)育的氣候、土壤及栽培條件，并對(duì)防治病蟲(chóng)害有相對(duì)的保護(hù)措施。
6 測(cè)定程序
6．1 送驗(yàn)樣品的重量
品種純度測(cè)定的送驗(yàn)樣品的最小重量應(yīng)符合表1的規(guī)定。
表1 品種純度測(cè)定的送驗(yàn)樣品重量 g
種 類 限于實(shí)驗(yàn)室測(cè)定 田間小區(qū)及實(shí)驗(yàn)室測(cè)定
豌豆屬、蠶豆屬、玉米屬、菜豆屬、玉米屬、
大豆屬及種于大小類似的其他屬 1000 2000
水稻屬、大麥屬、燕麥屬、小麥屬、黑麥屬及種
子大小類似的其他屬 500 1000
甜菜屬及種子大小類似的其他屬 250 500
所有其他屬 l00 250
6．2 種子鑒定
6．2. 1形態(tài)鑒定法
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)不超過(guò)100粒種子。
根據(jù)種子的形態(tài)特征，必要時(shí)可借助擴(kuò)大鏡等進(jìn)行逐粒觀察，必須備有標(biāo)準(zhǔn)樣品或鑒定圖片和有關(guān)資料。
水稻種子根據(jù)谷粒形狀、長(zhǎng)寬比、大小、稃殼和稃尖色、稃毛長(zhǎng)短、稀密、柱頭夾持率等；大麥種子根據(jù)籽粒形狀、外稃基部皺褶、籽粒顏色、腹溝基刺、腹溝展開(kāi)程度、外稃側(cè)背脈紋齒狀物及脈色、外稃基部稃殼皺褶凹陷。小穗軸茸毛多少、鱗被(漿片)形狀及茸毛稀密等；大豆種子可根據(jù)種子大小、形狀、顏色、光澤、光滑度，蠟粉多少及種臍形狀顏色等，蔥類可根據(jù)種子大小、形狀、顏色、表面構(gòu)造及臍部特征等。
6．2．2快速測(cè)定法
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)不超過(guò)100粒種子。
a. 苯酚染色法
小麥、大麥、燕麥；將種子浸入清水中經(jīng)18～24 h，用濾紙吸干表面水分，放入墊有已經(jīng)1％苯酚溶液濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)(腹溝朝下)。在室溫下，小麥保持4h，燕麥2h，大麥24h后即可鑒定染色深淺。小麥觀察穎果染色情況，大麥、燕麥評(píng)價(jià)種子內(nèi)外稃染色情況。通常顏色分為五級(jí)即淺色、淡褐色、褐色、深褐色和黑色。將與基本顏色不同的種子取出作為異品種。
水稻：將種子浸入清水中經(jīng)6 h，倒去清水，注入l％(m／v)苯酚溶液，室溫下浸12 h取出用清水洗滌，放在濾紙上經(jīng)24 h，觀察谷粒或米粒染色程度。谷粒染色分為不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五級(jí)，米粒染色分不染色、淡茶褐色，褐色或紫色三級(jí)。
b. 大豆種皮愈創(chuàng)木酚染色法
將每粒大豆種子的種皮剝下，分別放入小試管內(nèi)，然后注入1 mL 蒸餾水，在30℃下浸提1h，再在每支試管中加入10滴0.5%愈創(chuàng)木酚溶液，10min后，每支試管加入1滴0.1％過(guò)氧化氫溶液。1 min后，計(jì)數(shù)試管內(nèi)種皮浸出液呈現(xiàn)紅棕色的種子數(shù)與浸出液呈無(wú)色的種子數(shù)。
c. 高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測(cè)定法
配制l：5(m／V)氫氧化鉀和新鮮普通漂白粉(5.25％漂白粉)的混合液[即1g氫氧化鉀(KOH)加入5.0mL漂白液)，通常準(zhǔn)備100mL溶液，貯于冰箱中備用。將種子放入培養(yǎng)皿內(nèi)，加入氫氧化鉀—漂白液(測(cè)定前應(yīng)置于室溫一段時(shí)間)以淹沒(méi)種子為度。棕色種皮浸泡10 min。浸泡中定時(shí)輕輕搖晃使溶液與種子良好接觸，然后把種子倒在紗網(wǎng)上，用自來(lái)水慢慢沖洗，沖洗后把種子放在紙上讓其氣干，待種子干燥后，記錄黑色種子數(shù)與淺色種子數(shù)。
d． 燕麥種子熒光測(cè)定法
應(yīng)用波長(zhǎng)360A紫外光照射，在暗室內(nèi)鑒定。將種子排列在黑紙上，置于距紫外光下l0～15cm處，照射數(shù)秒至數(shù)分鐘后即可根據(jù)內(nèi)外稃有無(wú)熒光發(fā)出進(jìn)行鑒定。
c． 燕麥種子氯化氫測(cè)定法
將燕麥種子放入早已配好的氯化氧溶液[1份38％(V／V)鹽酸(HCl)和4份水]的玻璃器皿中浸泡 6 h，然后取出放在濾紙上讓其氣干1 h。根據(jù)棕褐色(熒光種子)或黃色(非熒光種子)來(lái)鑒別種子。
f． 小麥種子的氫氧化鈉測(cè)定法
當(dāng)小麥種子紅白皮不易區(qū)分(尤其是經(jīng)殺菌劑處理的種子)時(shí)，可用氫氧化鈉測(cè)定法加以區(qū)別。數(shù)取 400粒或更多的種子。先用95％(V／V)甲醇浸泡15min，然后讓種子干燥30min，在室溫下將種子浸泡在5M／L NaOH溶液中5min，然后將種子移至培養(yǎng)皿內(nèi)，不可加蓋，讓其在室溫下干燥，根據(jù)種子淺色和深色加以計(jì)數(shù)。
6．2．3 小麥、大麥醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺電泳法見(jiàn)附錄A(參考件)。
6．3 幼苗鑒別
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每重復(fù)為100粒種子。在培養(yǎng)室或溫室中可以用100，二次重復(fù)。
幼苗鑒定可以通過(guò)兩個(gè)主要途徑：一種途徑是提供給植株以加速發(fā)育的條件(類似于田間小區(qū)鑒定，只是所需時(shí)間較短)，當(dāng)幼苗達(dá)到適宜評(píng)價(jià)的發(fā)育階段時(shí)，對(duì)全部或部分幼苗進(jìn)行鑒定；另一種途徑是讓植株生長(zhǎng)在特殊的逆境條件下，測(cè)定不同品種對(duì)逆境的不同反應(yīng)來(lái)鑒別不同品種。
禾谷類：禾谷類作物的芽鞘、中胚軸有紫色與綠色兩大類，它們是受遺傳基因控制的。將種子播在砂中(玉米、高粱種子間隔1.0 cm×4.5 cm，燕麥、小麥種子間隔2.0 cm× 4.0cm，播種深度1.0cm)，在 25℃恒溫下培養(yǎng)，24 h光照。玉米、高粱每天加水，小麥、燕麥每隔4 d施加缺磷的Hoagland l號(hào)培養(yǎng)液。在幼苗發(fā)育到適宜階段時(shí)，高粱、玉米14d，小麥7d，燕麥10～14d，鑒定芽鞘的顏色。
注；缺磷的Hoagland 1號(hào)培養(yǎng)液配方：在1 L蒸餾水中加入4mLIm/L硝酸鈣溶液[Ca(NO3)2]、2 mLl M／L硫酸
鎂溶液(MgSO4)和6 mLIM／L硝酸鉀溶液(KN03)。
大豆：把種子播于砂中(種子間隔 2.5 cm×2.5 cm，播種深度2.5 cm)，在25℃下培養(yǎng)，24 h光照，每隔4 d施加 Hoaglandl 號(hào)培養(yǎng)液，至幼苗各種特征表現(xiàn)明顯時(shí)，根據(jù)幼苗下胚軸顏色(生長(zhǎng) 10～14d)，茸毛顏色(21 d)、茸毛在胚軸上著生的角度(2ld)、小葉形狀(2ld)等進(jìn)行鑒定。
注：Hoagland號(hào)培養(yǎng)液配方：在1L蒸餾水中加入l mL IM／L磷酸二氧鉀溶液(KH2PO4)，5 mL1 M／L。硝酸鉀溶
(KNO3)、5mLlM/L硝酸鈣溶液(Ca(NO3)2)和2mLl M／L硫酸鎂溶液(MgS04)。
萵苣：將萵苣種子播在砂中(種子間隔1.0cm×4.0 cm，播種深度1 cm)，在25℃恒溫下培養(yǎng)，每隔 4d施加Hoaglandl號(hào)培養(yǎng)液，3周后(長(zhǎng)有3～4片葉)根據(jù)下胚軸顏色、葉色、葉片卷曲程度和子葉等形狀進(jìn)行鑒別。
甜菜：有些栽培品種可根據(jù)幼苗顏色(白色、黃色、暗紅色或紅色)來(lái)區(qū)別。將種球播在培養(yǎng)皿濕砂上。置于溫室的柔和日光下，經(jīng)7d后，檢查幼苗下胚軸的顏色。根據(jù)白色與暗紅色幼苗的比例，可在一定程度上表明糖用甜菜及白色飼料甜菜栽培品種的真實(shí)性。
6．4 田間小區(qū)種植鑒定①
田間小區(qū)種植是鑒定品種真實(shí)性和測(cè)定品種純度的最為可靠、準(zhǔn)確的方法。為了鑒定品種真實(shí)性，
應(yīng)在鑒定的各個(gè)階段與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較。對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)樣品為栽培品種提供全面的、系統(tǒng)的品種特征特性的現(xiàn)實(shí)描述，標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)代表品種原有的特征特性，最好足育種家種子。標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)量應(yīng)足夠多，以便能持續(xù)使用多年，并在低溫干燥條件下貯藏，更換時(shí)最好從育種家處獲取。
注：①本節(jié)等效采用國(guó)際貿(mào)易中種子流通的OECD品種認(rèn)證方案《小區(qū)鑒定方法指南》(OECDl982)。
為使品種特征特性充分表現(xiàn)，試驗(yàn)的設(shè)汁和布局上要選擇氣候環(huán)境條件適宜的、土壤均勻、肥力一致，前茬無(wú)同類作物和雜草的田塊，并有適宜的栽培管理措施。
行間及株間應(yīng)有足夠的距離，大株作物可適當(dāng)增加行株距，必要時(shí)可用點(diǎn)播和點(diǎn)栽。
為了測(cè)定品種純度百分率，必須與現(xiàn)行發(fā)布實(shí)施的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系起來(lái)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)的種植株數(shù)要根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求而定，一般來(lái)說(shuō)，若標(biāo)準(zhǔn)為(N一1)×(100％／N，種植株數(shù) 4N即可獲得滿意結(jié)果，如標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定純度為98％，即N為50，種植200株即可達(dá)到要求。
檢驗(yàn)員應(yīng)擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，熟悉被檢品種的特征特性，能正確判別植株是屬于本品種還是變異株。變異株應(yīng)是遺傳變異，而不是受環(huán)境影響所引起的變異。
許多種在幼苗期就有可能鑒別出品種真實(shí)性和純度，但成熟期(常規(guī)種)、花期(雜交種)和食用器官成熟期(蔬菜種)是品種特征特性表現(xiàn)時(shí)期，必須進(jìn)行鑒定。
良種品種純度是否達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、合同和標(biāo)簽的要求，可利用表2進(jìn)行判別。
表2 品種純度的容許差距
(5％顯著水平的一尾測(cè)定)
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值 樣本株數(shù)、苗數(shù)或種子粒數(shù)
50%以上 50％以下 50 75 100 150 200 400 600 l000
100 0 O O O O O O O 0
99 1 2.3 1.9 1.6 1.3 1.2 0.8 0.7 0.5
98 2 3.3 2.7 2.3 1.9 1.2 1.2 0.9 0.7
97 3 4.O 3.3 2.8 2.3 2.0 l.4 l.2 0.9
96 4 4.6 l.7 3.2 2.6 2.3 l.6 1.3 1.O
95 5 5.1 4.2 3.6 2.9 2.5 1.8 1.5 1.1
94 6 5.5 4.5 3.9 3.2 2.8 2.0 1.6 l.2
93 7 6.0 4.9 4.2 3.4 3.0 2.1 1.7 1.3
92 8 6.3 5.2 4.5 3.7 2.2 2.2 1.8 1.4
91 9 6.7 5.5 4.7 3.9 3.3 2.4 1.9 1.5
90 10 7.O 5.7 5.0 4.0 3.5 2.5 2.O 1.6
89 ll 7.3 6.0 5.2 4.2 3.7 2.6 2.l l.6
88 12 7.6 6.2 5.4 4.4 3.8 2.7 2.2 1.7
87 13 7.9 6.4 5.5 4.5 3.9 2.8 2.2 1.8
86 14 8.1 6.6 5.7 4.7 4.O 2.9 2.3 1.8
85 15 8.3 6.8 5.9 4.8 4.2 3.0 2.4 1.9
84 16 8.6 7.0 6.l 4.9 4.3 3.0 2.5 l.9
83 17 8.8 7.2 6.2 5.1 4.4 3.1 2.5 2.0
82 18 9.0 7.3 6.3 5.2 4.5 3.2 2.6 2.0
8l 19 9.2 7.5 6.5 5.3 4.6 3.2 2.6 2.1
80 20 9.3 7.6 6.6 5.4 4.7 3.3 2.7 2.1
79 21 9.5 7.8 6.7 5.5 4.8 3.4 2.7 2.1
78 22 9.7 7.9 6.8 5.6 4.8 3.4 2.8 2.2
77 23 9.8 8.0 7.0 5.7 4.9 3.5 2.8 2.2
76 24 10.O 8.1 7.1 5.8 5.O 3.5 2.9 2.2
75 25 10.1 8.3 7.1 5.8 5.1 3.6 2.9 2.3
74 26 l0.2 8.4 7.2 5.9 5.l 3.6 3.0 2.3
續(xù)表2
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值 樣本株數(shù)、苗數(shù)或種子粒數(shù)
50%以上 50％以下 50 75 100 150 200 400 600 l000
73 27 10.4 8.5 7.3 6.0 5.2 3.7 3.0 2.3
72 28 10.5 8.6 7.4 6.1 5.2 3.7 3.0 2.3
71 29 10.6 8.7 7.5 6.1 5.3 3.8 3.1 2.4
70 30 10.7 8.7 7.6 6.2 5.4 3.8 3.1 2.4
69 31 10.8 8.8 7.6 6.2 5.4 3.8 3.1 2.4
68 32 10.9 8.9 7.7 6.3 5.5 3.8 3.2 2.4
67 33 11.0 9.0 7.8 6.3 5.5 3.9 3.2 2.5
66 34 11.1 9.0 7.8 6.4 5.5 3.9 3.2 2.5
65 35 11.1 9.1 7.9 6.4 5.6 3.9 3.2 2.5
64 36 11.2 9.1 7.9 6.5 5.6 4.0 3.2 2.5
63 37 11.3 9.2 8.0 6.5 5.6 4.0 3.3 2.5
62 38 11.3 9.2 8.0 6.5 5.7 4.0 3.3 2.5
61 39 11.4 9.3 8.1 6.6 5.7 4.0 3.3 2.5
60 40 11.4 9.3 8.1 6.6 5.7 4.0 3.3 2.6
59 41 11.5 9.4 8.1 6.6 5.7 4.1 3.3 2.6
58 42 11.5 9.4 8.2 6.7 5.8 4.1 3.3 2.6
57 43 11.6 9.4 8.2 6.7 5.8 4.1 3.3 2.6
56 44 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
55 45 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
54 46 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
53 47 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
52 48 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
51 49 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
50 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定純度要求很高的種子，如育種家種子、原種，是否符合要求，可利用淘汰值。淘汰值是在考慮種子生產(chǎn)者利益和有較少可能判定失誤的基礎(chǔ)上，把在一個(gè)樣本內(nèi)觀察到的變異株數(shù)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較，作出接受符合要求的種子批或淘汰該種子批，其可靠程度與樣本大小密切相關(guān)(見(jiàn)表3)。
表3 不同樣本大小符合標(biāo)準(zhǔn)99.9％接收含有變異株種子批的可靠程度
樣本大小（株數(shù)） 淘汰值 接受種子批的可靠程度，%
1.5／1000① 2／1000① 3／1000①
1000 4 93 85 65
4000 9 85 59 16
8000 14 68 27 1
12000 19 56 13 0.1
注：①是指每l000株中所實(shí)測(cè)到的變異株。
不同規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)與不同樣本大小下的淘汰值見(jiàn)表4，如果變異株大于或等于規(guī)定的淘汰值，就應(yīng)淘汰該種子批。
表4 不同規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)與不同樣本大小的淘汰值 （表中數(shù)字6、5、7、4、4有下標(biāo)線）
規(guī)定標(biāo)準(zhǔn) 不同樣本(株數(shù))大小的淘汰值
% 4000 2000 1400 1000 400 300 200
99.9 9 6 5 4 - - -
99.7 19 11 9 7 4 - -
99.0 52 29 21 16 9 7 6
注：下方有“一”的數(shù)字或“一”均表示樣本的數(shù)目太少。
7 結(jié)果計(jì)算和表示
7．1 種子和幼苗
用種子或幼苗鑒定時(shí)，用本品種純度百分率表示。
品種純度(％)＝{供檢種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）－異品種種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）}/供檢種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）×100
7．2 田間小區(qū)鑒定
將所鑒定的本品種、異品種、異作物和雜草等均以所鑒定植株的百分率表示。
8 結(jié)果報(bào)告
在實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室所測(cè)定的結(jié)果須填報(bào)種子數(shù)、幼苗數(shù)或植株數(shù)。
田間小區(qū)種植鑒定結(jié)果除品種純度外，可能時(shí)還填報(bào)所發(fā)現(xiàn)的異作物、雜草和其他栽培品種的百分率。
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定種子真實(shí)性和品種純度的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于農(nóng)作物種子質(zhì)量的檢測(cè)。
2 引用標(biāo)準(zhǔn)
GB／T 3543. 2 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 扦樣
GB／T 3543．4 農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程 發(fā)芽試驗(yàn)
3 術(shù)語(yǔ)
3. 1 種子真實(shí)性 genuineness of seed
供檢品種與文件記錄(如標(biāo)簽等)是否相符。
3．2 品種純度 varietal purity
品種在特征特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數(shù)占供檢本作物樣品種子數(shù)的百分率表示。
3．3 變異株 off-type
—個(gè)或多個(gè)性狀(特征特性)與原品種育成者所描述的性狀明顯不同的植株。
3．4 育種家種子 breeder seed
育種家育成的遺傳性狀穩(wěn)定的品種或親本種子的最初一批種子，用于進(jìn)一步繁殖原種種子。
3．5 原種 basic seed
用育種家種子繁殖的第一代至第三代，或按原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程生產(chǎn)的達(dá)到原種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的種子，用于進(jìn)—步繁殖良種種子。
3．6 良種 certified seed
用常規(guī)種原種繁殖的第—代至第三代和雜交種達(dá)到良種質(zhì)景標(biāo)準(zhǔn)的種子，用于大田生產(chǎn)。
4 試劑
苯酚，愈創(chuàng)木酚、過(guò)氧化氫、氫氧化鉀、氫氧化鈉，氯化氫。
5 儀器和設(shè)備
其儀器設(shè)備也隨方法的差異而不同。
a.在實(shí)驗(yàn)室中測(cè)定
配備適宜的儀器(如體視顯微鏡、擴(kuò)大鏡、解剖鏡)與試劑，以供種子形態(tài)、生理及細(xì)胞學(xué)的檢查、化學(xué)測(cè)定及種子發(fā)芽之用。
b. 在溫室和培養(yǎng)室中測(cè)定
配備能調(diào)節(jié)環(huán)境條件的設(shè)備(如生長(zhǎng)箱)，以利誘導(dǎo)鑒別性狀的發(fā)育。
c. 在田間小區(qū)里鑒定
需具有能使鑒定性狀正常發(fā)育的氣候、土壤及栽培條件，并對(duì)防治病蟲(chóng)害有相對(duì)的保護(hù)措施。
6 測(cè)定程序
6．1 送驗(yàn)樣品的重量
品種純度測(cè)定的送驗(yàn)樣品的最小重量應(yīng)符合表1的規(guī)定。
表1 品種純度測(cè)定的送驗(yàn)樣品重量 g
種 類 限于實(shí)驗(yàn)室測(cè)定 田間小區(qū)及實(shí)驗(yàn)室測(cè)定
豌豆屬、蠶豆屬、玉米屬、菜豆屬、玉米屬、
大豆屬及種于大小類似的其他屬 1000 2000
水稻屬、大麥屬、燕麥屬、小麥屬、黑麥屬及種
子大小類似的其他屬 500 1000
甜菜屬及種子大小類似的其他屬 250 500
所有其他屬 l00 250
6．2 種子鑒定
6．2. 1形態(tài)鑒定法
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)不超過(guò)100粒種子。
根據(jù)種子的形態(tài)特征，必要時(shí)可借助擴(kuò)大鏡等進(jìn)行逐粒觀察，必須備有標(biāo)準(zhǔn)樣品或鑒定圖片和有關(guān)資料。
水稻種子根據(jù)谷粒形狀、長(zhǎng)寬比、大小、稃殼和稃尖色、稃毛長(zhǎng)短、稀密、柱頭夾持率等；大麥種子根據(jù)籽粒形狀、外稃基部皺褶、籽粒顏色、腹溝基刺、腹溝展開(kāi)程度、外稃側(cè)背脈紋齒狀物及脈色、外稃基部稃殼皺褶凹陷。小穗軸茸毛多少、鱗被(漿片)形狀及茸毛稀密等；大豆種子可根據(jù)種子大小、形狀、顏色、光澤、光滑度，蠟粉多少及種臍形狀顏色等，蔥類可根據(jù)種子大小、形狀、顏色、表面構(gòu)造及臍部特征等。
6．2．2快速測(cè)定法
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)不超過(guò)100粒種子。
a. 苯酚染色法
小麥、大麥、燕麥；將種子浸入清水中經(jīng)18～24 h，用濾紙吸干表面水分，放入墊有已經(jīng)1％苯酚溶液濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)(腹溝朝下)。在室溫下，小麥保持4h，燕麥2h，大麥24h后即可鑒定染色深淺。小麥觀察穎果染色情況，大麥、燕麥評(píng)價(jià)種子內(nèi)外稃染色情況。通常顏色分為五級(jí)即淺色、淡褐色、褐色、深褐色和黑色。將與基本顏色不同的種子取出作為異品種。
水稻：將種子浸入清水中經(jīng)6 h，倒去清水，注入l％(m／v)苯酚溶液，室溫下浸12 h取出用清水洗滌，放在濾紙上經(jīng)24 h，觀察谷粒或米粒染色程度。谷粒染色分為不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五級(jí)，米粒染色分不染色、淡茶褐色，褐色或紫色三級(jí)。
b. 大豆種皮愈創(chuàng)木酚染色法
將每粒大豆種子的種皮剝下，分別放入小試管內(nèi)，然后注入1 mL 蒸餾水，在30℃下浸提1h，再在每支試管中加入10滴0.5%愈創(chuàng)木酚溶液，10min后，每支試管加入1滴0.1％過(guò)氧化氫溶液。1 min后，計(jì)數(shù)試管內(nèi)種皮浸出液呈現(xiàn)紅棕色的種子數(shù)與浸出液呈無(wú)色的種子數(shù)。
c. 高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測(cè)定法
配制l：5(m／V)氫氧化鉀和新鮮普通漂白粉(5.25％漂白粉)的混合液[即1g氫氧化鉀(KOH)加入5.0mL漂白液)，通常準(zhǔn)備100mL溶液，貯于冰箱中備用。將種子放入培養(yǎng)皿內(nèi)，加入氫氧化鉀—漂白液(測(cè)定前應(yīng)置于室溫一段時(shí)間)以淹沒(méi)種子為度。棕色種皮浸泡10 min。浸泡中定時(shí)輕輕搖晃使溶液與種子良好接觸，然后把種子倒在紗網(wǎng)上，用自來(lái)水慢慢沖洗，沖洗后把種子放在紙上讓其氣干，待種子干燥后，記錄黑色種子數(shù)與淺色種子數(shù)。
d． 燕麥種子熒光測(cè)定法
應(yīng)用波長(zhǎng)360A紫外光照射，在暗室內(nèi)鑒定。將種子排列在黑紙上，置于距紫外光下l0～15cm處，照射數(shù)秒至數(shù)分鐘后即可根據(jù)內(nèi)外稃有無(wú)熒光發(fā)出進(jìn)行鑒定。
c． 燕麥種子氯化氫測(cè)定法
將燕麥種子放入早已配好的氯化氧溶液[1份38％(V／V)鹽酸(HCl)和4份水]的玻璃器皿中浸泡 6 h，然后取出放在濾紙上讓其氣干1 h。根據(jù)棕褐色(熒光種子)或黃色(非熒光種子)來(lái)鑒別種子。
f． 小麥種子的氫氧化鈉測(cè)定法
當(dāng)小麥種子紅白皮不易區(qū)分(尤其是經(jīng)殺菌劑處理的種子)時(shí)，可用氫氧化鈉測(cè)定法加以區(qū)別。數(shù)取 400粒或更多的種子。先用95％(V／V)甲醇浸泡15min，然后讓種子干燥30min，在室溫下將種子浸泡在5M／L NaOH溶液中5min，然后將種子移至培養(yǎng)皿內(nèi)，不可加蓋，讓其在室溫下干燥，根據(jù)種子淺色和深色加以計(jì)數(shù)。
6．2．3 小麥、大麥醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺電泳法見(jiàn)附錄A(參考件)。
6．3 幼苗鑒別
隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取400粒種子，鑒定時(shí)須設(shè)重復(fù)，每重復(fù)為100粒種子。在培養(yǎng)室或溫室中可以用100，二次重復(fù)。
幼苗鑒定可以通過(guò)兩個(gè)主要途徑：一種途徑是提供給植株以加速發(fā)育的條件(類似于田間小區(qū)鑒定，只是所需時(shí)間較短)，當(dāng)幼苗達(dá)到適宜評(píng)價(jià)的發(fā)育階段時(shí)，對(duì)全部或部分幼苗進(jìn)行鑒定；另一種途徑是讓植株生長(zhǎng)在特殊的逆境條件下，測(cè)定不同品種對(duì)逆境的不同反應(yīng)來(lái)鑒別不同品種。
禾谷類：禾谷類作物的芽鞘、中胚軸有紫色與綠色兩大類，它們是受遺傳基因控制的。將種子播在砂中(玉米、高粱種子間隔1.0 cm×4.5 cm，燕麥、小麥種子間隔2.0 cm× 4.0cm，播種深度1.0cm)，在 25℃恒溫下培養(yǎng)，24 h光照。玉米、高粱每天加水，小麥、燕麥每隔4 d施加缺磷的Hoagland l號(hào)培養(yǎng)液。在幼苗發(fā)育到適宜階段時(shí)，高粱、玉米14d，小麥7d，燕麥10～14d，鑒定芽鞘的顏色。
注；缺磷的Hoagland 1號(hào)培養(yǎng)液配方：在1 L蒸餾水中加入4mLIm/L硝酸鈣溶液[Ca(NO3)2]、2 mLl M／L硫酸
鎂溶液(MgSO4)和6 mLIM／L硝酸鉀溶液(KN03)。
大豆：把種子播于砂中(種子間隔 2.5 cm×2.5 cm，播種深度2.5 cm)，在25℃下培養(yǎng)，24 h光照，每隔4 d施加 Hoaglandl 號(hào)培養(yǎng)液，至幼苗各種特征表現(xiàn)明顯時(shí)，根據(jù)幼苗下胚軸顏色(生長(zhǎng) 10～14d)，茸毛顏色(21 d)、茸毛在胚軸上著生的角度(2ld)、小葉形狀(2ld)等進(jìn)行鑒定。
注：Hoagland號(hào)培養(yǎng)液配方：在1L蒸餾水中加入l mL IM／L磷酸二氧鉀溶液(KH2PO4)，5 mL1 M／L。硝酸鉀溶
(KNO3)、5mLlM/L硝酸鈣溶液(Ca(NO3)2)和2mLl M／L硫酸鎂溶液(MgS04)。
萵苣：將萵苣種子播在砂中(種子間隔1.0cm×4.0 cm，播種深度1 cm)，在25℃恒溫下培養(yǎng)，每隔 4d施加Hoaglandl號(hào)培養(yǎng)液，3周后(長(zhǎng)有3～4片葉)根據(jù)下胚軸顏色、葉色、葉片卷曲程度和子葉等形狀進(jìn)行鑒別。
甜菜：有些栽培品種可根據(jù)幼苗顏色(白色、黃色、暗紅色或紅色)來(lái)區(qū)別。將種球播在培養(yǎng)皿濕砂上。置于溫室的柔和日光下，經(jīng)7d后，檢查幼苗下胚軸的顏色。根據(jù)白色與暗紅色幼苗的比例，可在一定程度上表明糖用甜菜及白色飼料甜菜栽培品種的真實(shí)性。
6．4 田間小區(qū)種植鑒定①
田間小區(qū)種植是鑒定品種真實(shí)性和測(cè)定品種純度的最為可靠、準(zhǔn)確的方法。為了鑒定品種真實(shí)性，
應(yīng)在鑒定的各個(gè)階段與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較。對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)樣品為栽培品種提供全面的、系統(tǒng)的品種特征特性的現(xiàn)實(shí)描述，標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)代表品種原有的特征特性，最好足育種家種子。標(biāo)準(zhǔn)樣品的數(shù)量應(yīng)足夠多，以便能持續(xù)使用多年，并在低溫干燥條件下貯藏，更換時(shí)最好從育種家處獲取。
注：①本節(jié)等效采用國(guó)際貿(mào)易中種子流通的OECD品種認(rèn)證方案《小區(qū)鑒定方法指南》(OECDl982)。
為使品種特征特性充分表現(xiàn)，試驗(yàn)的設(shè)汁和布局上要選擇氣候環(huán)境條件適宜的、土壤均勻、肥力一致，前茬無(wú)同類作物和雜草的田塊，并有適宜的栽培管理措施。
行間及株間應(yīng)有足夠的距離，大株作物可適當(dāng)增加行株距，必要時(shí)可用點(diǎn)播和點(diǎn)栽。
為了測(cè)定品種純度百分率，必須與現(xiàn)行發(fā)布實(shí)施的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系起來(lái)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)的種植株數(shù)要根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求而定，一般來(lái)說(shuō)，若標(biāo)準(zhǔn)為(N一1)×(100％／N，種植株數(shù) 4N即可獲得滿意結(jié)果，如標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定純度為98％，即N為50，種植200株即可達(dá)到要求。
檢驗(yàn)員應(yīng)擁有豐富的經(jīng)驗(yàn)，熟悉被檢品種的特征特性，能正確判別植株是屬于本品種還是變異株。變異株應(yīng)是遺傳變異，而不是受環(huán)境影響所引起的變異。
許多種在幼苗期就有可能鑒別出品種真實(shí)性和純度，但成熟期(常規(guī)種)、花期(雜交種)和食用器官成熟期(蔬菜種)是品種特征特性表現(xiàn)時(shí)期，必須進(jìn)行鑒定。
良種品種純度是否達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、合同和標(biāo)簽的要求，可利用表2進(jìn)行判別。
表2 品種純度的容許差距
(5％顯著水平的一尾測(cè)定)
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值 樣本株數(shù)、苗數(shù)或種子粒數(shù)
50%以上 50％以下 50 75 100 150 200 400 600 l000
100 0 O O O O O O O 0
99 1 2.3 1.9 1.6 1.3 1.2 0.8 0.7 0.5
98 2 3.3 2.7 2.3 1.9 1.2 1.2 0.9 0.7
97 3 4.O 3.3 2.8 2.3 2.0 l.4 l.2 0.9
96 4 4.6 l.7 3.2 2.6 2.3 l.6 1.3 1.O
95 5 5.1 4.2 3.6 2.9 2.5 1.8 1.5 1.1
94 6 5.5 4.5 3.9 3.2 2.8 2.0 1.6 l.2
93 7 6.0 4.9 4.2 3.4 3.0 2.1 1.7 1.3
92 8 6.3 5.2 4.5 3.7 2.2 2.2 1.8 1.4
91 9 6.7 5.5 4.7 3.9 3.3 2.4 1.9 1.5
90 10 7.O 5.7 5.0 4.0 3.5 2.5 2.O 1.6
89 ll 7.3 6.0 5.2 4.2 3.7 2.6 2.l l.6
88 12 7.6 6.2 5.4 4.4 3.8 2.7 2.2 1.7
87 13 7.9 6.4 5.5 4.5 3.9 2.8 2.2 1.8
86 14 8.1 6.6 5.7 4.7 4.O 2.9 2.3 1.8
85 15 8.3 6.8 5.9 4.8 4.2 3.0 2.4 1.9
84 16 8.6 7.0 6.l 4.9 4.3 3.0 2.5 l.9
83 17 8.8 7.2 6.2 5.1 4.4 3.1 2.5 2.0
82 18 9.0 7.3 6.3 5.2 4.5 3.2 2.6 2.0
8l 19 9.2 7.5 6.5 5.3 4.6 3.2 2.6 2.1
80 20 9.3 7.6 6.6 5.4 4.7 3.3 2.7 2.1
79 21 9.5 7.8 6.7 5.5 4.8 3.4 2.7 2.1
78 22 9.7 7.9 6.8 5.6 4.8 3.4 2.8 2.2
77 23 9.8 8.0 7.0 5.7 4.9 3.5 2.8 2.2
76 24 10.O 8.1 7.1 5.8 5.O 3.5 2.9 2.2
75 25 10.1 8.3 7.1 5.8 5.1 3.6 2.9 2.3
74 26 l0.2 8.4 7.2 5.9 5.l 3.6 3.0 2.3
續(xù)表2
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值 樣本株數(shù)、苗數(shù)或種子粒數(shù)
50%以上 50％以下 50 75 100 150 200 400 600 l000
73 27 10.4 8.5 7.3 6.0 5.2 3.7 3.0 2.3
72 28 10.5 8.6 7.4 6.1 5.2 3.7 3.0 2.3
71 29 10.6 8.7 7.5 6.1 5.3 3.8 3.1 2.4
70 30 10.7 8.7 7.6 6.2 5.4 3.8 3.1 2.4
69 31 10.8 8.8 7.6 6.2 5.4 3.8 3.1 2.4
68 32 10.9 8.9 7.7 6.3 5.5 3.8 3.2 2.4
67 33 11.0 9.0 7.8 6.3 5.5 3.9 3.2 2.5
66 34 11.1 9.0 7.8 6.4 5.5 3.9 3.2 2.5
65 35 11.1 9.1 7.9 6.4 5.6 3.9 3.2 2.5
64 36 11.2 9.1 7.9 6.5 5.6 4.0 3.2 2.5
63 37 11.3 9.2 8.0 6.5 5.6 4.0 3.3 2.5
62 38 11.3 9.2 8.0 6.5 5.7 4.0 3.3 2.5
61 39 11.4 9.3 8.1 6.6 5.7 4.0 3.3 2.5
60 40 11.4 9.3 8.1 6.6 5.7 4.0 3.3 2.6
59 41 11.5 9.4 8.1 6.6 5.7 4.1 3.3 2.6
58 42 11.5 9.4 8.2 6.7 5.8 4.1 3.3 2.6
57 43 11.6 9.4 8.2 6.7 5.8 4.1 3.3 2.6
56 44 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
55 45 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
54 46 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
53 47 11.6 9.5 8.2 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
52 48 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
51 49 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
50 11.7 9.5 8.3 6.7 5.8 4.1 3.4 2.6
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定純度要求很高的種子，如育種家種子、原種，是否符合要求，可利用淘汰值。淘汰值是在考慮種子生產(chǎn)者利益和有較少可能判定失誤的基礎(chǔ)上，把在一個(gè)樣本內(nèi)觀察到的變異株數(shù)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較，作出接受符合要求的種子批或淘汰該種子批，其可靠程度與樣本大小密切相關(guān)(見(jiàn)表3)。
表3 不同樣本大小符合標(biāo)準(zhǔn)99.9％接收含有變異株種子批的可靠程度
樣本大小（株數(shù)） 淘汰值 接受種子批的可靠程度，%
1.5／1000① 2／1000① 3／1000①
1000 4 93 85 65
4000 9 85 59 16
8000 14 68 27 1
12000 19 56 13 0.1
注：①是指每l000株中所實(shí)測(cè)到的變異株。
不同規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)與不同樣本大小下的淘汰值見(jiàn)表4，如果變異株大于或等于規(guī)定的淘汰值，就應(yīng)淘汰該種子批。
表4 不同規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)與不同樣本大小的淘汰值 （表中數(shù)字6、5、7、4、4有下標(biāo)線）
規(guī)定標(biāo)準(zhǔn) 不同樣本(株數(shù))大小的淘汰值
% 4000 2000 1400 1000 400 300 200
99.9 9 6 5 4 - - -
99.7 19 11 9 7 4 - -
99.0 52 29 21 16 9 7 6
注：下方有“一”的數(shù)字或“一”均表示樣本的數(shù)目太少。
7 結(jié)果計(jì)算和表示
7．1 種子和幼苗
用種子或幼苗鑒定時(shí)，用本品種純度百分率表示。
品種純度(％)＝{供檢種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）－異品種種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）}/供檢種子粒數(shù)（幼苗數(shù)）×100
7．2 田間小區(qū)鑒定
將所鑒定的本品種、異品種、異作物和雜草等均以所鑒定植株的百分率表示。
8 結(jié)果報(bào)告
在實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室所測(cè)定的結(jié)果須填報(bào)種子數(shù)、幼苗數(shù)或植株數(shù)。
田間小區(qū)種植鑒定結(jié)果除品種純度外，可能時(shí)還填報(bào)所發(fā)現(xiàn)的異作物、雜草和其他栽培品種的百分率。
