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豬布魯氏桿菌病確診方法

   日期:2016-04-21     來(lái)源:聚農(nóng)網(wǎng)    作者:jn720.com    瀏覽:163    
 (一)細(xì)菌學(xué)檢查

用流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物或陰道分泌物等材料制成菲薄的涂片,干燥、火焰固定后,用沙黃一孔雀綠染色法染色,布魯氏菌被染成淡紅色、小球狀桿菌,其他細(xì)菌或細(xì)胞為綠色或藍(lán)色。也可觀察其培養(yǎng)特性。

小動(dòng)物感染試驗(yàn):應(yīng)用豚鼠接種分離的布魯氏菌,比用培養(yǎng)基分離可靠,因病料內(nèi)細(xì)菌不多時(shí),用培養(yǎng)基分離培養(yǎng)常不能生長(zhǎng)。正式試驗(yàn)時(shí),取子宮分泌物、乳汁流產(chǎn)胎兒胃內(nèi)容物、羊水、精液或病變組織,制成混懸液等,給2只體重350 - 400g的豚鼠皮下或腹腔接種,一般為0.5-1.0 - 2.0mL,接種后第2周開(kāi)始采血,以后,每隔7-10d采血1次,檢查血清抗體,如凝集價(jià)達(dá)1:5以上時(shí),即認(rèn)為是陽(yáng)性反應(yīng),證明已感染了布魯氏菌,此時(shí),可從豚鼠心血中分離培養(yǎng)細(xì)菌,即使分離不到細(xì)菌,也可判為已感染布魯氏菌。通常一只在接種后第三周剖殺,另一只在第6周剖殺,如見(jiàn)到鼠蹊淋巴結(jié)與腰下淋巴結(jié)腫大,脾腫大、表面粗糙,有結(jié)節(jié)狀病灶,肝臟有灰白色細(xì)小平坦的壞死小結(jié)節(jié),更可進(jìn)一步證實(shí)試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果;若注射的豚鼠不發(fā)病,剖檢無(wú)病變,臟器分離培養(yǎng)陰性,可報(bào)告陰性。如為公豚鼠,腹腔接種時(shí),可引起睪丸炎。如在接種后第3個(gè)月末,豚鼠不發(fā)病,未死亡,血清反應(yīng)仍陰性,可報(bào)告為陰性。

(二)血清學(xué)試驗(yàn)

1.凝集反應(yīng)  動(dòng)物感染布魯氏菌的4-5d后,血液中即出現(xiàn)凝集素,隨后凝集滴度逐漸增高,能持續(xù)1-2年或更久,以試管凝集反應(yīng)檢查時(shí),豬在1:50達(dá)“++”或“++"以上者,判為陽(yáng)性反應(yīng),在1: 25達(dá)“++”時(shí)為疑似反應(yīng)。大群檢疫時(shí),為提高效率,可用玻板凝集反應(yīng),豬血清在0.04mL處凝集,判為陽(yáng)性反應(yīng);在0.08mL處凝集時(shí),判為疑似反應(yīng)。

判為可疑的豬,3-4周后應(yīng)采血重檢,如仍為可疑反應(yīng)??砂匆韵虑闆r來(lái)確定,即該群中既無(wú)本病的流行病情況發(fā)生,也無(wú)臨床病例出現(xiàn),血檢也無(wú)陽(yáng)性時(shí),則可判為陰性反應(yīng)。

2.虎紅平板凝集反應(yīng)  虎紅布魯氏菌有色抗原呈酸性,且具有緩沖作用,并能抑制引起非特異性反應(yīng)的IgM的活性和增強(qiáng)特異性IgG的活性,使反應(yīng)的敏感性提高,特異性優(yōu)于常規(guī)試管凝集反應(yīng)。檢驗(yàn)時(shí),取被檢血清與虎紅抗原各0.03mL,滴加于平板上混勻,放置4 - 10min觀察結(jié)果二只要有凝集現(xiàn)象出現(xiàn),即可判為陽(yáng)性反應(yīng)。

3.其他方法‘熒光抗體染色法、間接炭凝集反應(yīng)、間接紅細(xì)胞凝集反應(yīng)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、特異性花結(jié)吸附染色、酶標(biāo)SPA染色、二巰基乙醇(2-ME)凝集反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)、細(xì)胞免疫檢查法、乳汁環(huán)狀反應(yīng)、熱凝集反應(yīng)、凝膠電泳法等均可用于布魯氏菌病的診斷。閻守敦等(1990)應(yīng)用凝膠電泳法來(lái)鑒別布氏桿菌的人工感染和疫苗接種。近年來(lái),間接血凝試驗(yàn)、抗球蛋白(Coombs)試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、熒光抗體法、DNA探針以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)等新的方法逐漸被用于本病診斷或檢疫。


 
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