1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種 乳鼠對(duì)蓋他病毒甚為易感。一般采集病死乳豬的腦、肺、腎、扁桃體等組織,制成1:10懸液,反復(fù)凍融后離心,取上清液接種于1-2日齡乳鼠腦內(nèi),觀察死亡情況。同時(shí)用已知陽(yáng)性和陰性血清做中和試驗(yàn)。
2.病毒分離 采集病死乳豬的適宜組織,制備1:10懸液,離心取上清液,接種BHK-21、豬胚腎、豬腎、倉(cāng)鼠肺或非洲綠猴腎細(xì)胞做細(xì)胞培養(yǎng),經(jīng)1-2d即能看到明顯的細(xì)胞病變,可判為陽(yáng)性。如有懷疑,可以盲傳2代,無(wú)致細(xì)胞病變作用即可判為陰性。
3.血清學(xué)檢驗(yàn)
(1)血凝抑制試驗(yàn):日本已有市售診斷用試劑盒,可按常規(guī)方法做微量血凝抑制試驗(yàn)。試驗(yàn)前待檢血清需除去非特異性因素,方法是將血清先用丙酮處理,再用鵝紅細(xì)胞吸附,最后在56℃滅活30min 。試驗(yàn)過(guò)程:抗原與血清混合后在4℃過(guò)夜,加0.33%鵝紅細(xì)胞混合,于37℃作用1h觀察結(jié)果,血清的血凝滴度(HI)在1:10以上,即判為陽(yáng)性。
(2)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn):抗原由蓋他病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)液濃縮和純化。檢測(cè)方法按常規(guī)進(jìn)行,檢測(cè)的敏感性與血凝抑制試驗(yàn)基本一致。